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标准的PCR实验室设计规划


PCR实验室也叫基因扩增实验室,是一种分子生物学技术,它可以通过基因追踪系统,快速的掌握病毒成份,检测出病毒存在的数量、是否具有传染性等,它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方.又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。博泰小编带您了解相关信息:

 

标准的实验室设计规划:

  

1、PCR实验室平面布局

PCR扩增检验实验室原则上分为三个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增和扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增和扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。

  

2、实验室空调通风系统设计及压力控制

PCR实验室并没有严格的净化等级要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。

  

a.试剂贮存和准备区

该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制,本区应对外界保持微正压。

 

b.标本制备区

该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。

  

c.扩增和扩增产物分析区

该区域主要进行的操作为DNA扩增和扩增片段的测定。此外,已制备的DNA模板(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。

  

3、污染的预防与控制

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。

  

a.工作区域的严格划分

各个实验区域设置合理;各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。

  

b.合理的系统设置

合理的空调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统;严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。

  

c.规范的操作

扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作;在实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施;清洁工作及时、正确。实验工作结束后,必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外,对一些实验设备还应进行高压消毒处理。

  

d.严格的管理

严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门;尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性;扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等;扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。

  

e.完备的实验室配套设施

完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。

  

PCR实验室设计功能间布局:

 

1.试剂配制区:就是将常用的贮液与溶液通过溶解,然后分装成小份进行贮存,或者用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。在此过程中会直接接触到化学试剂,需要格外注意安全,实验可在通风橱柜进行操作,排风系统设计的时候,需要合理控制,能够保证实验室内操作人员安全,以及保证实验室周边环境安全。

  

2.样品处理区:主要是处理样品的接收、保存、粉碎、留样、存放、过期留样等问题,比如说样品接收的时候需要对样品进行编号标识,粘贴标签,样品的状态,是已接样、待检中、还是检测完毕。每个功能间都要根据使用的情况来配备样品柜、实验台、排气样品柜等,根据样品的物特性来选配。

  

3.核酸扩增区:用于扩增反应体系的配制和模板的加入,核酸的扩增检测,此间需要配备安全生物柜,以安全防护为主要目的。

  

4.产物分析区:用于扩增产物的检测和确认,如果实验室采用的自动扩增检测仪,则可以将核酸扩增区与扩增产物分析区合并为一个区,同样的,此功能间也是要以安全为主要目的。


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